細胞培養(yǎng)瓶是生命研究和實踐中使用量比較大的一種細胞耗材，多用于貼壁細胞的培養(yǎng)，使用過程中，正確的操作方式是確保實驗順利進行的前提，這種耗材使用時注意以下幾點：
1、關(guān)于蓋子：一次性細胞培養(yǎng)瓶的蓋子不要擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH 7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，一次性細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。
2、降低“生長空洞”：多數(shù)用戶使用的不是的預(yù)包被一次性細胞培養(yǎng)瓶，而是普通的一次性細胞培養(yǎng)瓶，其表面環(huán)境并不利于無血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細胞貼壁。37℃放置5-10分鐘，可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與一次性細胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合，使得間充質(zhì)干細胞的貼壁能力增強，降低“生長空洞”出現(xiàn)的概率。
血清培養(yǎng)基瓶500ml
3、細胞消化：將瓶子豎立放置，吸走培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中的脫落細胞較多，說明細胞現(xiàn)在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，來回輕微晃動培養(yǎng)瓶直到細胞完全脫落，加入10mlMEM，混勻，不能吹打，分裝2瓶，如果細胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果瓶中的細胞貼壁較牢固，培養(yǎng)基上清沒有細胞脫落碎片，且細胞長滿達到80%以上，吸走培養(yǎng)基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速輕微晃動，豎立培養(yǎng)瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過3min，細胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻，分裝2瓶。
細胞對于生長環(huán)境非常敏感，細胞培養(yǎng)瓶作為一種較為常用的耗材，在操作時更要謹慎，嚴格按照規(guī)定流程進行，避免因操作不當影響細胞生長。
