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細(xì)胞培養(yǎng)瓶作為細(xì)胞培養(yǎng)常用的耗材之一，對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖起著至關(guān)重要的作用。目前市面上的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要以玻璃或塑料材質(zhì)為主，這類(lèi)耗材不同于普通的醫(yī)藥塑料瓶，價(jià)格相對(duì)比較高，那么這種瓶子可以重復(fù)使用嗎？

細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶是一種可同時(shí)滿足試驗(yàn)和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中對(duì)細(xì)胞和組織的大規(guī)模生產(chǎn)要求的高質(zhì)量耗材，廣泛適用于動(dòng)植物細(xì)胞、細(xì)菌、病毒的培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)常會(huì)遇到污染細(xì)胞的情況，常見(jiàn)的幾種污染如下：

細(xì)胞培養(yǎng)瓶是一種方形、寬瓶頸的細(xì)胞培養(yǎng)容器，是貼壁細(xì)胞培養(yǎng)常用的耗材。細(xì)胞的生長(zhǎng)受到多種因素的影響，其中常見(jiàn)的主要是以下四個(gè)方面：

細(xì)胞搖瓶是懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)常會(huì)用到的一種細(xì)胞耗材，不同于貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。除了氣體環(huán)境、PH、滲透壓等條件外，搖床轉(zhuǎn)速也會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)需要適宜的生長(zhǎng)環(huán)境和生長(zhǎng)溫度，這需要選擇合適的搖床進(jìn)行輔助。恒溫?fù)u床是與細(xì)胞搖瓶搭配使用的一種專(zhuān)用設(shè)備，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)搖床需要不停的轉(zhuǎn)動(dòng)，來(lái)為細(xì)胞提供氣體條件，同時(shí)也可以避免細(xì)胞沉積而帶來(lái)的細(xì)胞死亡。

在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞搖瓶是常用的一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材。懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。在實(shí)際培養(yǎng)中，我們?nèi)绾未_定加液量的多少呢？細(xì)胞搖瓶常見(jiàn)的規(guī)格包括125ml、250ml、500ml、1000ml，滿足不同規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)需求，如125ml與250ml小容量的瓶子主要應(yīng)用于小規(guī)模的試驗(yàn)，而500ml和1000ml規(guī)格則用于中的規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)。這種耗材使用時(shí)要借助搖床的震動(dòng)來(lái)降低細(xì)胞的抱團(tuán)率，維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

細(xì)菌、真菌污染細(xì)菌和真菌污染很容易被檢測(cè), 因?yàn)槭艿郊?xì)菌、真菌污染的細(xì)胞, 培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的明顯特征。細(xì)菌污染會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、顏色改變以及pH值急劇變化, 受污染的貼壁細(xì)胞在幾天內(nèi)會(huì)逐漸脫壁死亡。真菌污染后的細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢, 培養(yǎng)基中會(huì)漂浮白色

今天富道細(xì)胞來(lái)跟大家分享一下常見(jiàn)細(xì)胞中的HepG2細(xì)胞用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)的情況。該細(xì)胞來(lái)源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。模式染色體數(shù)為55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。目前尚未證明該細(xì)胞中有HBV基因組。它的培養(yǎng)環(huán)境分為：ATCC：90% MEM+10% FBS

今天富道細(xì)胞來(lái)跟大家分享一下細(xì)胞工廠中的黑膠蟲(chóng)污染：目前關(guān)于它的本質(zhì)還說(shuō)法不一，要在高倍鏡下才能看到，培養(yǎng)基內(nèi)有能動(dòng)的小黑點(diǎn)、高倍鏡下可見(jiàn)黑色小蟲(chóng)游走、會(huì)穿梭的黑色點(diǎn)狀顆粒。黑膠蟲(chóng)污染后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)差、低倍下呈黑色點(diǎn)狀、高倍下做布朗運(yùn)動(dòng)、培養(yǎng)基不渾濁、與細(xì)胞數(shù)量成反比。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)總會(huì)遇到一些特殊情況而養(yǎng)不好細(xì)胞，今天富道細(xì)胞就來(lái)跟大家分享一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢應(yīng)該怎么辦。接種量太少。細(xì)胞長(zhǎng)得太滿會(huì)有接觸抑制，而細(xì)胞接種濃度低，也會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖較慢。一般情況下，細(xì)胞長(zhǎng)至80-90%可進(jìn)行傳代，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)得不太滿時(shí)進(jìn)行了傳代，會(huì)使得細(xì)胞接種濃度太低，可能導(dǎo)致細(xì)胞自分泌的物質(zhì)濃度減少，造成生細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)最怕出現(xiàn)的情況可能就是細(xì)胞培養(yǎng)瓶的發(fā)現(xiàn)了污染了，今天富道細(xì)胞來(lái)跟大家分析一下細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)的污染情況細(xì)胞房要保證干燥整潔，不然很容易染菌。真菌污染后，培養(yǎng)液清亮，培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)絲狀物，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。一旦發(fā)現(xiàn)真菌污染，可能導(dǎo)致整個(gè)培養(yǎng)箱中的細(xì)胞受到污染。需要徹底清理打掃培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、水浴鍋、細(xì)胞房等。

我們?cè)诎l(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法，先把每種試劑：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板，放在培養(yǎng)箱過(guò)夜/2天（因?yàn)?℃冰箱溫度低不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，拿來(lái)涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細(xì)菌污染也不能排除污染，因?yàn)榧?xì)菌會(huì)依附在細(xì)胞上，空培沒(méi)有細(xì)胞，細(xì)菌又很小很難看到，所以最長(zhǎng)可放置7天，若7天后還沒(méi)有污染跡象就可以排除！）。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，如果出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況下，我們這段時(shí)間的努力可能都會(huì)白費(fèi)。那我們?nèi)绾畏直孢@些污染的情況呢？今天富道細(xì)胞就跟大家分享一下。

我們之前介紹了細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)常見(jiàn)的污染，今天富道細(xì)胞就來(lái)跟大家說(shuō)一下細(xì)胞工廠預(yù)防細(xì)胞污染及補(bǔ)救方法。我們應(yīng)對(duì)細(xì)胞工廠內(nèi)出現(xiàn)污染最好對(duì)策是預(yù)防，這一點(diǎn)是毋庸置疑的。所以我們?cè)谂囵B(yǎng)時(shí)細(xì)胞要勤快，平時(shí)所用到的一次性耗材不可重復(fù)使用，使用輔助的器皿等要及時(shí)高壓滅菌，滅菌后超過(guò)一周未使用也應(yīng)重新滅菌。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)都有可能會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染富道細(xì)胞總結(jié)了一些常見(jiàn)細(xì)胞工廠的分類(lèi)它們分別為：細(xì)菌污染、真菌污染、霉菌污染，支原體污染。細(xì)菌污染一般是芽孢桿菌、葡萄球菌造成的，污染的主要特征為細(xì)胞工廠等細(xì)胞培養(yǎng)耗材中培養(yǎng)基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細(xì)胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下可見(jiàn)桿狀或球狀的細(xì)菌在培養(yǎng)基中游動(dòng)（與細(xì)胞碎片的布朗運(yùn)動(dòng)明顯不同）。需注意的是，在污染初期，細(xì)菌常成群存在，不一定會(huì)有明顯的運(yùn)動(dòng)，此時(shí)需引起警惕。

我們立即棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，以PBS潤(rùn)洗2~3次，加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時(shí)棄去胰酶，加入PBS輕輕潤(rùn)洗1遍； 在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入20×雙抗，浸泡細(xì)胞3~5min，棄去雙抗，并加入新鮮的完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）培養(yǎng)12h；12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤(rùn)洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基（含10×雙抗），傳代時(shí)以較小轉(zhuǎn)速離心（如平時(shí)以1000r/min離心，則可降為800~900r/min離心），仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

我們?cè)谑褂眉?xì)胞搖瓶培養(yǎng)一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周?chē)膽腋〖?xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。