在利用細(xì)胞工廠進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時,經(jīng)常會涉及到對細(xì)胞活力和增殖情況的測定,在諸多測定方法中,細(xì)胞計數(shù)法是常用的一種.
細(xì)胞計數(shù)法是利用血細(xì)胞計數(shù)板計量細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量,從而推算細(xì)胞的增殖和鋪板密度的方法,簡單易操作,但是耗材時間較長,所需細(xì)胞量比較多。同時,由于是人工操作,這種計數(shù)方法存在一定的誤差。對細(xì)胞工廠中的細(xì)胞計數(shù),可以按照以下步驟操作:
1.準(zhǔn)備適合該中細(xì)胞消化濃度的胰蛋白酶消化液,吸出培養(yǎng)基,加入消化液,在孵箱中消化適宜的時間,待細(xì)胞變圓后加入等量或大于消化液體積的培養(yǎng)基終止消化。離心后,用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液;
2. 將蓋玻片放置在血細(xì)胞計數(shù)板中間處,用10ul小槍頭或者毛細(xì)吸管吸取少量的細(xì)胞懸液,然后將細(xì)胞懸液緩慢注入蓋玻片和計數(shù)板的接觸邊緣,虹吸作用會讓細(xì)胞懸液緩慢進(jìn)入小室,充滿間隙;
3.用 100倍顯微鏡下觀察情況,計算中央方格和四個角落的方格中的細(xì)胞數(shù)量。原則是計左不計右,計上不計下,也就是說,計算壓在左邊中線和上邊中線的細(xì)胞,但是不計算右邊中線和下邊中線的細(xì)胞;
4. 使用后,用超純水和75%乙醇清洗干凈;
5. 細(xì)胞密度=平均細(xì)胞數(shù)*104*稀釋倍數(shù)(個/ml);
6. 細(xì)胞總數(shù)=細(xì)胞密度*細(xì)胞懸液體積(個)。
測定細(xì)胞工廠中的細(xì)胞生長狀況可以按照以上步驟操作,需要注意的是,如果顯微鏡下有兩個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個細(xì)胞計算,如果細(xì)胞團(tuán)過多,超過10%,則說明分散情況不好,需要重新制備細(xì)胞懸液進(jìn)行測定。