細胞的體外培養(yǎng)技術是指在無菌、適當?shù)臏囟群鸵欢ǖ臈l件下,使細胞生存、生長和繁殖的過程,細胞搖瓶是培養(yǎng)懸浮細胞常用的一種耗材。在培養(yǎng)細胞時,了解細胞的生長情況,根據(jù)具體情況做出相應調(diào)整是試驗的必然操作。
一般情況下,我們可以通過顯微鏡觀察細胞的狀態(tài),活細胞中間透亮、飽滿、有光澤,死細胞則較暗。此外還可以通過臺盼藍染色法來計算細胞搖瓶中的細胞活力。臺盼藍是一種有機化合物,常用作細胞活性染料,用于檢測細胞膜的完整性,檢測細胞是否存活。活細胞不會被染成藍色,而死細胞會被染成淡藍色。
用品準備:
1. 4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
2. 吸管、血細胞計數(shù)板、顯微鏡
操作步驟:
1、制備單細胞懸液。并作適當稀釋(106 細胞/ml)
2、染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。
3、計數(shù):在三分鐘內(nèi),用計數(shù)板分別計數(shù)活細胞和死細胞。
4、活細胞率(%)= 活細胞總數(shù)/(活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù))×100。
綜上所述,區(qū)分細胞搖瓶中的活細胞和死細胞可以利用以上兩種方法。在利用臺盼藍法染細胞時,時間不宜過長。否則部分活細胞也會著色,干擾計數(shù)。
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