細胞培養(yǎng)板是一種多孔結構的細胞培養(yǎng)耗材,一般由透明的聚苯乙烯原料制成,常見的有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔等,主要用于實驗室細胞培養(yǎng)。在細胞劃痕實驗中,就用到了這種耗材。
多孔細胞培養(yǎng)板
細胞劃痕實驗是實驗室分析細胞遷移能力的常用方法,其原理是當細胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。在細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像,通過比較圖像以確定細胞遷移速率。其操作過程如下:
1.準備工作:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)
2.先用marker筆在細胞培養(yǎng)板背后,用直尺比著,均勻地劃橫線,大約每隔0.5-1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
96孔細胞培養(yǎng)板
3.在空中加入約5X105個細胞,具體數(shù)量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。
4.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂直于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不要傾斜。
5.用PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入無血清培養(yǎng)基。
6.放入37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0、6、12、24小時取樣,拍照。
在做細胞劃痕實驗時需要注意,在選擇細胞培養(yǎng)板時盡量選用6孔板,它可以保證有相當距離的平直劃痕,因為有5 條定位線與劃痕相交,這樣就有 10 個可固定監(jiān)測點,不作重復,可以減小誤差。