細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)。除了保護細(xì)胞外，常利用這種技術(shù)來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。那么，我們怎樣將凍存的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)呢？
凍存的細(xì)胞需要復(fù)蘇后才能進行下一步的操作，復(fù)蘇細(xì)胞時速到要快，這樣可以很好的保存細(xì)胞的活力，在操作時可按如下步驟進行：
1. 收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整；打開外包裝，取出保存于干冰中的細(xì)胞；
2. 檢查凍存管是否有破損，內(nèi)容物是否融化，將取出的凍存管迅速放入37℃水浴鍋中融化；
3. 凍存管用75%酒精消毒，放入生物安全柜中；
4. 將5ml完全培養(yǎng)基加入15ml離心管中備用；
5 將凍存管中的細(xì)胞懸液加入到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中，輕輕混勻；
6. 將15mL離心管放入離心機中離心，1000rpm/min（約200g）離心3-5min；
7. 將5ml完全培養(yǎng)基加入到25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中備用；
T175細(xì)胞培養(yǎng)瓶
8. 取出離心好的細(xì)胞，酒精消毒后放入安全柜中；
9. 輕輕吸去離心好的細(xì)胞上清，加入1ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
10. 將重懸好的細(xì)胞加入到準(zhǔn)備的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻；
11. 在顯微鏡下觀察接種的細(xì)胞狀態(tài)及密度，將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
在細(xì)胞復(fù)蘇過程中，快速融合可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。所用到的細(xì)胞培養(yǎng)瓶及其他耗材，應(yīng)確保無菌。
