傳代培養(yǎng)是指需要將分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。細(xì)胞培養(yǎng)瓶是培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)常用的耗材，那么，如何對(duì)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞進(jìn)行傳代操作呢？
T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶
一般在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后基本飽和，為了使細(xì)胞能夠繼續(xù)生殖，同時(shí)擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量，就需要進(jìn)行傳代操作。懸浮細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞成單個(gè)細(xì)胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力。觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過(guò)程往往需要5-15分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過(guò)程中不要拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，細(xì)胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的完全培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不是必需的。如果細(xì)胞需要無(wú)血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞再傳代。
細(xì)胞傳代的比例一般是1:2-1:20，具體要視細(xì)胞的類型而定。在傳代過(guò)程中，胰蛋白酶會(huì)對(duì)一些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，可以用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。
