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細胞培養(yǎng)瓶是貼壁細胞培養(yǎng)時常用的工具，在培養(yǎng)細胞時涉及到細胞的傳代操作。我們該如何將貼壁細胞進行傳代呢？可以按以下步驟操作：

1.取出預熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

2. 從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞：注意細胞培養(yǎng)瓶取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞。

3. 將細胞培養(yǎng)瓶放入超凈工作臺后打開瓶口，同時要在酒精燈上燒口消毒。

4. 加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細胞較好好，消化溫度是 37℃。

5. 顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度。

6. 棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液終止反應。小心吹打成細胞懸液。

7. 將細胞懸液吸入 10 ml 離心管中。平衡后將離心管放入離心機中，以 1000 rpm/min 離心 5 min。

8. 棄去上清液，加入適當體積的培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。

9. 將細胞懸液吸出分裝至 2 - 3 個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

10. 顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量，必要時計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應該不低于 5×105 /ml。最后要做好標記。

11. 繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當旋松瓶蓋，放入 CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細胞 2 - 4 h 后開始貼附在瓶壁上。

細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞傳代涉及到細胞的消化，我們要注意控制好消化時間，避免因為消化過度，對細胞造成損傷。