冬蟲夏草是一種藥學(xué)價(jià)值很高的中藥,由于生長(zhǎng)周期比較長(zhǎng),自然繁殖的蟲草不足以滿足市場(chǎng)的需求,于是不少人對(duì)蟲草的人工栽培進(jìn)行探索,利用細(xì)胞搖瓶和發(fā)酵罐進(jìn)行蟲草菌絲體的液體發(fā)酵是目前應(yīng)用比較多的一種方法。
(1) 固體細(xì)胞搖瓶菌種培養(yǎng):將分離純化的菌種接種于50毫升搖瓶培養(yǎng)基中,放入19°C培養(yǎng)箱,培養(yǎng)20天,待菌絲長(zhǎng)滿三角瓶并產(chǎn)孢即可。
(2)液體搖瓶種子培養(yǎng):在500毫升瓶中裝入200毫升培養(yǎng)基,高壓滅菌30分鐘,冷卻至室溫后將經(jīng)分散后的2瓶固體瓶菌種接種到500毫升三角瓶培養(yǎng)基上,并置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱,溫度19℃±1X:,180轉(zhuǎn)/分條件下培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為10~ 12天。
(3)—級(jí)種子罐:在50L氣升式發(fā)酵罐中裝入21L液體培養(yǎng)基,pH值為6.0~7.0,并加人0.03%食用消泡劑。高壓滅菌后冷卻至20℃,將4瓶上述培養(yǎng)好的500毫升搖瓶種子接入培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為19~20℃,通氣量為1 : 0.5升(升?分鐘),保壓 (4.903~7.0845)\104帕。經(jīng)7天通氣培養(yǎng),達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即中止,最終培養(yǎng)體積為30升。
(4)二級(jí)種子罐:在500升種子罐中裝人300L液體培養(yǎng)基, pH值為6.0~7.0,并加人0.03%食用消泡劑,高壓滅菌后冷卻 至20°C,將一級(jí)種子罐的30升液體種子全部接人二級(jí)種子罐培養(yǎng),培養(yǎng)溫度19~20℃,通氣量為1 : 0.5升(升·分鐘),保壓 (4.903~7.0845)乂104帕。經(jīng)過7天通氣培養(yǎng),達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后即中止,培養(yǎng)體積為300升。
(5)發(fā)酵罐:在5噸發(fā)酵罐中裝入3噸液體培養(yǎng)基,pH值為 6.0~7.0,并加入0.03%食用消泡劑,高壓滅菌后冷卻至20℃, 將二級(jí)種子罐培養(yǎng)好的液體種子300升全部接人發(fā)酵罐培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為19~20°C,通氣量為1 : 0. 4~0.5升(升?分鐘),罐壓(4.903~7.0845) X104帕,培養(yǎng)時(shí)間5天。當(dāng)發(fā)酵液中出現(xiàn)大量小菌球,鏡檢發(fā)現(xiàn)大量菌絲,殘?zhí)窃谝韵拢l(fā)酵液較黏稠,顏色明顯加深時(shí),可中止發(fā)酵出罐。將發(fā)酵液離心,菌絲體烘干,粉碎,檢測(cè),包裝,發(fā)酵濾液濃縮后除菌分裝,檢測(cè),出廠。
以上是利用細(xì)胞搖瓶進(jìn)行冬蟲夏草液體發(fā)酵培養(yǎng)的具體流程,通過這種方式不僅可生產(chǎn)出直接利用的菌絲體和發(fā)酵液,還可為下游深加工提供大量原料。