細胞工廠培養(yǎng)技術是大規(guī)模細胞培養(yǎng)時常用的方式,溶液是細胞培養(yǎng)時不可或缺的因素,培養(yǎng)植物細胞要用組織培養(yǎng)液,哺乳動物細胞一般需要小牛血清和特定的培養(yǎng)基,此外,消化終止液也是經(jīng)常用到的一類溶液。
在利用細胞工廠培養(yǎng)細胞的過程中,把握好胰酶消化的程度是關鍵。消化過度則對細胞的活性損傷較大,并有細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難以脫落,反復吹打同樣也會損傷細胞活性。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍后存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。
在培養(yǎng)過程中要注意觀察細胞的狀態(tài),在細胞變圓但未完全脫落時,吸取正在消化的胰酶輕輕吹打細胞工廠直到細胞脫落,加入終止液終止消化,混勻細胞。
如果沒有專門的終止液,要嚴格掌握消化時間,在細胞被消化到球形還沒有完全離開細胞工廠底部壁的時候,吸取胰酶,加入無血清培養(yǎng)基吹打細胞成懸液,轉移入離心管反復沖洗兩次,再接種。操作時一定要注意動作輕柔,避免過多損傷細胞。
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