細(xì)胞生長(zhǎng)到一定程度后,需要利用消化酶將其消化下來(lái),進(jìn)行下一步的培養(yǎng)。雖然消化細(xì)胞是一項(xiàng)常規(guī)操作,但不注意也會(huì)影響細(xì)胞后期的生長(zhǎng)。那么,我們?cè)撊绾蜗?a href="http://www.shajihua.cn/gsyp.html" target="_blank">細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶內(nèi)的細(xì)胞呢?
首先,消化細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞需要借助消化酶,常用的包括胰蛋白酶和膠原酶,具體選用哪種要根據(jù)細(xì)胞的種類(lèi)及試驗(yàn)情況而定,消化細(xì)胞具體操作流程如下:
1、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)
3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。
4、此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。
消化細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞時(shí)要控制好時(shí)間,如果消化過(guò)度容易造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下,甚至造成細(xì)胞破碎。