細胞培養(yǎng)涉及到細胞接種、培養(yǎng)、收獲等流程,細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞生長到一定程度就需要收獲細胞了,這時候就需要借助胰酶對瓶壁上的細胞進行消化后再收獲,但在使用胰酶的過程中一定要控制好消化時間。
胰酶屬于異種蛋白酶,可以將細胞膜上和細胞培養(yǎng)瓶結(jié)合的蛋白質(zhì)降解。通過在特定位置上降解蛋白,使蛋白間結(jié)合處蛋白降解,細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架張力作用下成為球形,從而使細胞分開。胰酶消化的程度是細胞培養(yǎng)中的一個關鍵步驟:消化過度細胞碎片增多,黑渣子增多,細胞會成片脫落,嚴重影響細胞活性,并有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,反復吹打同樣也會損傷細胞活性。
在不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為8.0、溫度為37時,胰酶溶液的作用能力比較強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。