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細胞工廠內(nèi)細胞MTT法檢測原理和步驟
發(fā)表日期:2021-12-20

細胞工廠是貼壁細胞培養(yǎng)經(jīng)常會用到的一耗材,在實驗過程中我們要實時掌握細胞的生長狀態(tài),根據(jù)具體情況做出相關(guān)調(diào)整。可以通過MTT法對細胞的活性進行檢測,從而確定細胞生長情況。

MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。

細胞工廠內(nèi)細胞MTT法檢測原理和步驟_富道細胞

g/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器盡量用鋁箔紙包住。


在利用MTT法測定細胞工廠內(nèi)的細胞活性時要注意,MTT有致癌性,用的時候小心。這種方法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力,但不能測定細胞絕對數(shù)。在用酶標儀檢測結(jié)果的時候,為了保證實驗結(jié)果的線性,MTT 吸光度盡量在0-0.7 范圍內(nèi)。

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