細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶是一種常用的細(xì)胞培養(yǎng)耗材,主要用于各種懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),小容量的瓶子也可以用于培養(yǎng)基的制備或儲存。在培養(yǎng)CHO細(xì)胞時,就會用到這種耗材。
CHO細(xì)胞是一個轉(zhuǎn)化細(xì)胞系,1957年從得到,被廣泛地用來表達(dá)的蛋白。在對CHO細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時,首先將傳代培養(yǎng)基(CD CHO)置于室溫,使其溫度恢復(fù)至室溫后再轉(zhuǎn)入37℃ 搖床內(nèi)預(yù)熱30 min,再利用移液器將種子細(xì)胞液從凍存管內(nèi)吸出打入裝有預(yù)熱培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶內(nèi),加入適量培養(yǎng)液,開始培養(yǎng)。細(xì)胞復(fù)蘇過程要注意無菌操作,溶解凍存細(xì)胞時速度一定要快,避免緩慢升溫細(xì)胞內(nèi)形成冰晶,對細(xì)胞造成損傷。
在細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶內(nèi)培養(yǎng)2-3天后,細(xì)胞密度增高,營養(yǎng)物質(zhì)逐漸耗盡,需要對細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)培。根據(jù)細(xì)胞密度計算擴(kuò)培體積,當(dāng)達(dá)到反應(yīng)器擴(kuò)培接種細(xì)胞數(shù)量后,停止培養(yǎng),接種至反應(yīng)器進(jìn)行擴(kuò)培。
裝有培養(yǎng)基10層細(xì)胞工廠
在利用細(xì)胞培養(yǎng)搖瓶進(jìn)行CHO細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)時,一般要借助搖床進(jìn)行規(guī)律的晃動,以防止細(xì)胞堆積,影響其生長與繁殖。操作時還要注意無菌,避免因為操作不當(dāng)引入細(xì)菌污染,對細(xì)胞生長造成不良影響。