細(xì)胞爬片是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng)，在做免疫熒光、激光共聚焦、凋亡檢測(cè)時(shí)，免不了要制備細(xì)胞爬片。制備時(shí)需要一些耗材，其中細(xì)胞培養(yǎng)板是一種必備耗材。具體的制備步驟如下：
1、爬片準(zhǔn)備
1）爬片可用一般的蓋玻片，也可用專(zhuān)用細(xì)胞爬片。可根據(jù)自己的需要，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色剪裁成合適大小，置于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板、12孔板或24孔板；
2）將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再置于無(wú)水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍，放在玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
3）高壓后取出放入烤箱中烤干，放入超凈臺(tái)中備用。
2、細(xì)胞爬片
1）胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于完全培養(yǎng)基中。
2）加細(xì)胞時(shí)，根據(jù)玻片的大小，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。
3）根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)即可。
4）待細(xì)胞貼壁后，可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5）按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，作用一定時(shí)間后取玻片。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話(huà)，將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。
3、細(xì)胞爬片固定
細(xì)胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗，因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過(guò)程中有可能會(huì)脫落。在固定時(shí)可以選用冷丙酮、多聚甲醛、95％乙醇等固定液，以達(dá)到很好的固定效果。
以上是利用細(xì)胞培養(yǎng)板制備細(xì)胞爬片的具體過(guò)程，爬片的質(zhì)量絕對(duì)了拍照的質(zhì)量及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性，在操作時(shí)要嚴(yán)格按照流程進(jìn)行。
