細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長的過程。在這項(xiàng)操作中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是必不可少的一種耗材，它主要是為細(xì)胞提供良好的生長表面與環(huán)境，以促使細(xì)胞達(dá)到良好的生長狀態(tài)。細(xì)胞復(fù)蘇的過程如下：
細(xì)胞復(fù)蘇
1、將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細(xì)胞死亡率，復(fù)蘇過程中一般細(xì)胞死亡率在20%～25%之間。
2、迅速用擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。
3、小心開啟瓶蓋，把細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，36℃～38℃培養(yǎng)1h，讓細(xì)胞貼壁。
4、細(xì)胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細(xì)胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細(xì)胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，36℃～38℃培養(yǎng)。
5、24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層，便可以傳代。
6、詳細(xì)記錄復(fù)蘇細(xì)胞的名稱、數(shù)量、復(fù)蘇時間、存放部位等。
以上是利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇的具體步驟，需要注意的是，細(xì)胞凍存液的融化速度要快，盡量在1-2min內(nèi)完成，否則容易造成細(xì)胞損傷。
